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日期:2022-12-07瀏覽:253次
在Elisa實驗步驟中,溫育是不可 HUO 缺的一項要點。而顯色是Elisa中的*后一步溫育反應(yīng),此時酶催化無色的底物有色的產(chǎn)物。我公司每周都有*新技術(shù)分享給您,今天上海勁馬公司帶給您的*新技術(shù)是Elisa實驗步驟溫育反應(yīng)之顯色:
反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴(yán)格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間,及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,再延長反應(yīng)時間,可使本底值增高。
OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行,顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達 DING 峰,隨即逐漸減弱,至2小時后即可 WAN 全消退至無色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。