李燕紅 楊 謙 李錦亮 莊錦填 李振潔 鐘金寶

【摘     要】   目的     探討加味當(dāng)歸芍藥散抑制組蛋白乙酰化酶ｐ３００（ｐ３００ＨＡＴ）／血清環(huán)加氧酶－２（ＣＯＸ－２）通路調(diào)控核因子 Ｅ２相關(guān)因子２（Ｎｒｆ２）在黃褐斑形成中的作用機(jī)制。方法     健康人表皮黑素細(xì)胞及３０只雌性小鼠納入研究，采用不同濃度加味當(dāng)歸芍藥散處理健康人表皮黑素細(xì)胞，肌肉注射及紫外線照射建立黃褐斑小鼠模型，將小鼠隨機(jī)分為空白組、低劑量組及高劑量組各１０只，分別給予常規(guī)劑量０．９％氯化鈉注射液、低劑量及高劑量加味當(dāng)歸芍藥散處理，檢測不同濃度處理下細(xì)胞活力、細(xì)胞黑素含量及細(xì)胞中ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達(dá)量，同時(shí)檢測治療前后３組小鼠皮膚及肝臟的ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ、蛋白質(zhì)表達(dá)量。結(jié)果加味當(dāng)歸芍藥散濃度為１．０ｍｇ／ｍＬ 時(shí)健康人表皮黑素細(xì)胞活力較對照組明顯低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ ＜０．０５）；加味當(dāng)歸芍藥散處理的健康人表皮黑素細(xì)胞ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２的 ＲＮＡ 及蛋白表達(dá)量和黑素相對含量較對照組明顯低，Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達(dá)量較對照組明顯高，且隨著加味當(dāng)歸芍藥散濃度增加，健康人表皮黑素細(xì)胞 ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２、Ｎｒｆ２的 ＲＮＡ 及蛋白表達(dá)量降低、升高越明顯，健康人表皮黑素細(xì)胞黑素相對含量降低越明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ ＜０．０５）；治療后僅低劑量、高劑量組ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２的 ＲＮＡ、蛋白表達(dá)量較治療前明顯降低，Ｎｒｆ２的ＲＮＡ、蛋白表達(dá)量明顯升高，且治療后高劑量組各項(xiàng)指標(biāo)變化較低劑量組明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ ＜０．０５）。結(jié)論   加味當(dāng)歸芍藥散治療黃褐斑的機(jī)制可能與其抑制ｐ３００ＨＡＴ／ＣＯＸ－２通路調(diào)控 Ｎｒｆ２表達(dá)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】   黃褐斑； 環(huán)氧化酶２； 加味當(dāng)歸芍藥散； ｐ３００ＨＡＴ； Ｎｒｆ２

黃褐斑屬于臨床常見面部皮膚黑色素沉著疾病，易診難治，病因與日曬、內(nèi)分泌失調(diào)、遺傳、情緒 及化妝品等有關(guān)，臨床對其治療尚缺乏單一藥。近年來，運(yùn)用各種中藥治療黃褐斑并取得了一定的臨床療效［１］。現(xiàn)階段臨床對黃褐斑發(fā)病機(jī)制尚未*明確，一項(xiàng)研究表明環(huán)加氧酶－２（ＣＯＸ－２）催化花生   四烯酸合成的具有生物學(xué)活性的前列腺素衍生物可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成消炎、抗氧化的親電羰基衍生物分子， 并可解離轉(zhuǎn)錄因子核因子 Ｅ２ 相關(guān)因子２（Ｎｒｆ２），激活多種與抗氧化相關(guān)的含抗氧化反應(yīng)元件（ＡＲＥ）應(yīng)答元件的基因，ＣＯＸ－２調(diào)控 Ｎｒｆ２可能與其抗炎及抗氧化機(jī)制有緊密聯(lián)系［２］，其在黃褐斑形成中可能發(fā)揮一定作用，此 外 ＣＯＸ－２ 的表達(dá)與共激活因子ｐ３００ＨＡＴ 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)［３］。而近期一項(xiàng)研究指出當(dāng)歸芍藥散具有顯著的抗氧化、清除自由基等作用［４］，因而本項(xiàng)目在既往研究基礎(chǔ)上開展檢測加味當(dāng)歸芍藥散作用人表皮黑素細(xì)胞生長情況以及組蛋白乙酰化酶ｐ３００（ｐ３００ＨＡＴ）、ＣＯＸ－２ 及 Ｎｒｆ２ 的表達(dá)水平，并建立黃褐斑小鼠模型，對其實(shí)行加味當(dāng)歸芍 藥 散 灌 胃 處 理 ， 并 檢 測 小 鼠 皮 膚 、 肝 臟 的ｐ３００ＨＡＴ、ＣＯＸ－２及 Ｎｒｆ２ 的表達(dá)水平，通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)研究，探討加味當(dāng)歸芍藥散治療黃褐斑的有關(guān)機(jī)制。

１ 材料與方法

１．１  材料：３０只雌性昆明種小鼠由上海西普爾－必凱實(shí)驗(yàn)動物中心提供，小鼠體質(zhì)量１８～２０ｇ，平均體質(zhì)量（１９．６±０．３）ｇ；健康人表皮黑素細(xì)胞株由中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院腫瘤研究所提供。主要試劑及儀器：①主要試劑：由南京建成生物工程有限公司提供的丙二醛試劑盒（批號：２０１３０５１７）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）試劑盒（批號：２０１４０３１９）、總蛋白定量測試盒（批號：２０１４０３１９），由上海滬鼎生物科技有限公司提供的酪氨 酸 酶 酶聯(lián) 免 疫 吸 附 試 驗(yàn)（ＥＬＩＳＡ）試劑盒，由上海通用藥業(yè)股份有限公司提供的注射液（批號：１３０４０４），四甲基偶氮唑藍(lán)、二甲基亞砜由上海華美生物工程公司提供；②主要儀器：中波紫外線治療儀由 Ｓｉｇｍａ 公司提供，ＤＧ３０２２Ａ 型酶標(biāo)儀由華東電子管廠提供，由美國Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司提供的 Ｄｉｒｅｃｔ－Ｑ 型超純水儀，德 國ＩＫＡ 公司提供的ＩＫＡ Ｔ１８Ｂ 型組織勻漿機(jī)，美國Ｂｅｃｋｍａｎ公司提供的 Ｃｏｕｖｔｅｒ高速冷凍離心機(jī)。

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