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日期:2016-05-27瀏覽:867次
今日上午,我司錢收到來自上海交通大學一位學生的,咨詢到ELISA試劑盒實驗流程中要重點注意哪些地方?我司將此問的解析整理如下:
各種類型測定時一般需經過以下步驟:
固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結果。ELISA操作較繁雜,操作不當將引起較大的誤差。
實驗流程中需要重點注意的地方:
1、隨著病情的進展或由其他因素影響,某些抗體在機體內的含量發生大幅波動,因此有必要對標本進行預處理。
2、在成批手工檢測中,還應注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異,使抗原抗體反應和酶促反應時間不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,不注意可能會導致錯誤結果或定量不準。
3、洗滌可用洗板機洗板或手工洗板,前者洗滌質量較好,各反應孔洗滌效果均一,批內、批間差異小,手工洗板應注意控制各孔洗滌效果,差異不宜太大。
4、準確判定結果須使用測讀儀(酶標儀),比色法判讀可選擇單波長或雙波長,根據反應液顏色的不同選用不同波長的濾光片,以空白孔校零測定反應孔的吸光度值(A值)。酶標儀具有良好的重復性。
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