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實(shí)驗(yàn)過程中常見問題解答

日期:2019-03-14瀏覽:1265次

    上海滬鼎生物科技有限公司是國(guó)內(nèi)ELISA試劑盒供應(yīng)商,代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,專業(yè)供應(yīng)科研實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基,抗體,動(dòng)物血清血漿,標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品,化學(xué)試劑,酶聯(lián)免疫試劑盒,白介素試劑盒,金標(biāo)檢測(cè)試劑盒,微生物,蛋白質(zhì),ELISA種屬涵蓋廣。公司自成立以來憑借多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn),完善的售后服務(wù),高質(zhì)量的產(chǎn)品一直為廣大科研者提供所需。就目前總結(jié)出以下幾點(diǎn)實(shí)驗(yàn)過程中常見問題:
1.一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間?
雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要3.5-4小時(shí),競(jìng)爭(zhēng)ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。

2.血清樣本如何處理?
全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3. 血漿樣本如何處理?
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

4.細(xì)胞上清液樣本如何處理?
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細(xì)收集上清。

5.細(xì)胞裂解液樣本如何處理?
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融或者超聲破碎,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心10分鐘左右(5000×g)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

6.組織樣本如何處理?
用預(yù)冷的PSB (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

7.為什么有的試劑盒是采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法?
小分子抗原或半抗原因?yàn)槿狈勺鲓A心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,可以采用競(jìng)爭(zhēng)法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)生物素化抗體上的結(jié)合位點(diǎn),標(biāo)本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的生物素化抗體愈少,*后的顯色也愈淺,即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素等ELISA測(cè)定多用此法。

8.用什么軟件處理ELISA檢測(cè)的數(shù)據(jù)比較好?
ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合可以應(yīng)用Curve Expert軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。它使用非常方便,可以漂亮的曲線應(yīng)用到論文之中。軟件可以在下載中心進(jìn)行下載。

9. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦?
實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想請(qǐng)及時(shí)與客服或技術(shù)支持聯(lián)系,我們可以幫您一起分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果僅憑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無法判斷,您可以將試劑盒發(fā)回給我們進(jìn)行售后檢測(cè)。如果是試劑盒本身的質(zhì)量問題,可以為您退換貨;如果是實(shí)驗(yàn)操作的問題,技術(shù)人員可以給您一些改進(jìn)的建議。
    希望以上文獻(xiàn)匯總能幫助大家了解目前研究進(jìn)展及我們的核心技術(shù),歡迎各位老師聯(lián)系我們咨詢、提出意見,愿我們的努力成果與您的科研碰撞出不一樣的火花!

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