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日期:2019-03-06瀏覽:1710次
生物科研這件事真的是微妙微翹,有太多種變化,太多種可能發生。比如說在細胞融合后選擇性培養的過程中,就會有大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡,此時單個或少數分散的雜交瘤細胞多半不易存活,通常必須加入其它活細胞使之繁殖。而這種被加入的活細胞稱之為飼養細胞(Feeder Cells)。飼養細胞促進其他細胞增殖的機制尚不明了,一般認為它們可能釋放非種屬特異性的生長ci激因子,為雜交瘤細胞提供必要的生長條件;也可能是為了滿足新生的雜交瘤對細胞密度的依賴性。在常用的飼養細胞中有胸腺細胞、正常脾細胞和腹水巨噬細胞。其中小鼠的腹腔巨噬細胞來源及制備較為方便,且有吞噬清除死亡細胞的作用,因此使用為方便。
下面就讓上海滬鼎生物科技有限公司帶您去看看制備方法:
1、小鼠(一般選取經產母鼠)脫頸椎致死,注意斷頸椎時盡量減少對腹腔的壓迫,避免損傷腹腔內血管,以防飼養細胞內含有大量血細胞。
2、將小鼠浸泡于75%酒精中5min,然后手提住小鼠尾巴,上下于酒精中涮洗數次。置于超凈臺無菌平皿中。
3、用無菌剪鑷從后腹剪開皮膚,沿兩側剪開皮膚,暴露腹部,注意不要損傷腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜。
4、用注射器吸取6-8ml的不*培養基注射入腹腔,注意注射時用鑷子提起腹膜,避免針頭刺到腸管等腹腔臟器。
5、用棉球輕輕an摩腹部1min,吸出注入的培養液。
6、800-1000 r/min離心5-10 min,棄去上清。若腹腔血管損傷,沉淀中可見有紅細胞。
7、用5ml HAT培養基懸浮細胞,根據細胞計數結果,補加HAT培養基,使細胞濃度達2×105/ml。(一般情況下一只經產母鼠可鋪2-3塊96孔板。)
通常對巨噬細胞來說,96孔板每孔需要2×104個細胞,24孔板需105個細胞。每只小鼠可采~5×106個細胞,因此一只小鼠可供兩塊96孔板飼養細胞。
8、將上述細胞懸液加入96孔板,每孔0.1ml,37℃,6% CO2的培養箱培養。
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