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日期:2018-10-17瀏覽:2052次
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這類反應的定性結果可以用肉眼判斷。目視標本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中,正常人血清反應后常可出現呈色的本底,此本底的深淺因ELISA試劑盒的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照。
陰性對照的組成應為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的指標。此時酶催化無色的底物有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內,陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,加入底物后的反應溫度和時間應按規定力求準確。
ELISA試劑盒定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴格控制,有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯se情況適當縮短或延長反應時間,及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深,再延長反應時間,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉向棕黃色。
TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩定性,宜在規定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用后ELISA試劑盒,約40分鐘顯色達,隨即逐漸減弱,ELISA試劑盒至2小時后即可*消退至無色。
TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色,此時可用特定的波長測讀吸光值。
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